Prova di raduno del corredo di ELISA di (SM) della streptomicina
1. Principio
Questo corredo della prova è basato sull'immunotest enzimatico competitivo per la rilevazione del residuo dei sulfamidici. Gli antigeni dell'accoppiamento sono ricoperti prima sulle bande micro--bene. I sulfamidici nel campione e negli antigeni dell'accoppiamento ricoperti prima sulle bande micro--bene competono per gli anticorpi dei anti-sulfamidici. Dopo che l'aggiunta del coniugato degli enzimi, il substrato di TMB si aggiunge per colorazione. Il valore di (OD) di densità ottica del campione ha una correlazione negativa con i sulfamidici nel campione. Questo valore è confrontato alla curva standard e la concentrazione nei sulfamidici successivamente è ottenuta.
2. caratteristiche tecniche
Sensibilità: 1 ppb
Temperatura dell'incubatrice: 25℃
Tempo dell'incubatrice: 30min~15min
Limite di segnalazione
Tessuto (metodo di alto-rilevazione-limite) 0,4 ppb
Ppb 5 del tessuto (metodo di basso-rilevazione-limite)
Ppb Honey1
Sensibilità: 0,1 ppb
Temperatura di incubazione: 37℃
Tempo di incubazione: 30min-30min-15min
Limite di segnalazione:
Ppb del pollo 1
Il fegato di pollo, munge il ppb 4
Miele, ppb della pappa reale 2
Tasso di recupero:
Latte 85±22%
Pollo 80±17%
Miele, pappa reale 75±19%
Tasso di reazione crociata:
Streptomicina 100%
Diidrostreptomicina 108%
Conclusione <0>
di gentamicina <0>
di Kalamycin ricavata dal tasso di reazione crociata: Questo corredo può essere usato per la prova dei sulfamidici, completamente risponde all'esigenza nazionale di prova dei sulfamidici.
Tasso di recupero
Tessuto, urina, milk85±25%
Miele, serum80±23%
3. componenti
1) strisce micro--bene: 12 strisce con 8 pozzi smontabili ciascuna
2) 6× soluzione tipo (1 ml ciascuno): 0 ppb, 0,1 ppb, 0,4 ppb, 1,6 ppb, 6,4 ppb, ppb 25,6
3) spiritello malevolo del coniugato degli enzimi (12 ml)
4) cappuccio blu della soluzione di lavoro dell'anticorpo (7 ml)
5) cappuccio bianco della soluzione del substrato A (7 ml)
6) berretto nero della soluzione del substrato B (7 ml)
7) ferma il cappuccio di giallo della soluzione (7 ml)
8) 20× ha concentrato il cappuccio bianco dell'amplificatore di lavaggio (40 ml)
9) 10× ha concentrato la ridissoluzione del cappuccio trasparente della soluzione (50 ml)
4. materiali richiesti ma non forniti
1) attrezzatura: il lettore del microplate, lo stampatore, l'omogeneizzatore, il dispositivo dell'azoto-essiccazione, centrifuga, misurante pipetta, equilibrio (una sensibilità reciproca di 0,01 g), incubatrice
2) micropipette: µL 20-200 µL ad un solo canale, 100-1000 e µL multicanale 30-300;
3) reagenti: Acetonitrile (CH3CN), acetato di etile, n-esano, K2HPO4·12H2O, monoidrato dell'acido citrico (C6H8O7·H2O), HCl, NaOH, CH2Cl2,
5. pretrattamento del campione
Istruzioni (i seguenti punti devono occuparsi prima del pretrattamento)
1) soltanto le punte eliminabili possono essere usate per gli esperimenti e le punte devono essere cambiate una volta usate per l'assorbimento dei reagenti differenti;
2) prima dell'esperimento, ogni utensile sperimentale deve essere pulito e dovrebbe ri-essere pulito se necessario, per evitare la contaminazione che interferisce con i risultati sperimentali.
Preparazione della soluzione prima di pretrattamento del campione:
1) soluzione del NaOH di 0.2M: Pesi il NaOH 0.8g, dissolva con acqua deionizzata 100ml;
2) HCl di 0.5M: Prenda l'HCl 4.3ml, dissolva con acqua deionizzata a 100ml, miscela uniformemente;
3) Na2HPO4- C6H8O7·Amplificatore di H2O: pesi 19.85gNa2HPO4·12H2O e 9.3g C6H8O7·H2O, si dissolvono uniformemente con acqua deionizzata a 1L, miscela;
4) soluzione CH3CN-CH2Cl2: V CH3CN: V =1:4 CH2Cl2;
5) il 20× concentrato ridissolvendo la soluzione è diluito con acqua deionizzata al 1:19 (1 parte concentrata ridissolvendo soluzione + 19 parti di acqua deionizzata).
5,1 tessuto
Metodo di Alto-rilevazione-limite del A.
Metodo uno
1) pesa 2,0 il ± 0,05 g del campione di tessuto omogeneizzato nel tubo centrifugo da 50 ml, aggiunge 6 ml di acetato di etile, scossa per 2 min, centrifuga superiore a 4000 r/min a ℃ 15 per il min 10;
2) richiede a 3 ml la chiara fase organica in un contenitore asciutto, soffia per asciugarsi con azoto o aria completamente da evaporazione rotatoria a ℃ 50-60
6) dissolve i residui asciutti in 1 ml della soluzione di ridissoluzione diluita, aggiunge 1 ml di n-esano, miscela per 30 secondi; la centrifuga superiore a 4000 r/min a 15℃ per 5 min. rimuove la fase superiore del n-esano di strato,
7) soluzione di giù-strato 50µl della presa per ulteriore analisi.
Popolare di diluizione del campione: 1
Metodo due
1) pesa 2 il ± 0,05 g del campione omogeneizzato, ha messo nel tubo della centrifuga 50ml;
2) aggiunge la soluzione di 8ml CH3CN-CH2Cl2, scossa per 5min, centrifuga superiore a 4000 r/min a ℃ 15 per il min 10;
3) trasferisce una fase organica di 4 ml in un contenitore asciutto, soffia per asciugarsi con azoto o aria completamente da evaporazione rotatoria a ℃ 56
4) aggiunge 1 ml della soluzione di ridissoluzione diluita per ridissolvere il residuo asciutto, aggiunge 1 ml di n-esano e scuote per 30s. Centrifuga superiore a 4000 r/min a 15℃ per il min 5;
5) rimuove la fase superiore del n-esano di strato. Prenda 50 che il µL giù mette a strati la soluzione per ulteriore analisi.
Popolare di diluizione del campione: 1
Metodo di basso-rilevazione-limite di B. Tissue
1) pesa 2,0 il ± 0,05 g del campione omogeneizzato in un tubo centrifugo da 50 ml, aggiunge 8 ml diluito ridissolvendo la soluzione, scossa per 2 min, centrifuga superiore a 4000 r/min a ℃ 15 per il min 10;
2) prende una soluzione di 50 µL per ulteriore analisi.
Popolare di diluizione del campione: 5
5,2 siero
1) dispone il campione del siero nella temperatura ambiente per 30 min, centrifuga sopra a 4000r/min a ℃ 10 per il min 10, la separazione del siero o siero del filtrante
2) prende un siero da 1 ml ed aggiunge 3mL la soluzione di ridissoluzione diluita, miscela per 30s.
3) prende una soluzione di 50 µL per ulteriore analisi
Popolare di diluizione del campione: 4
5,3 miele
1. pesi il campione del miele di 2±0.05 g, aggiungono 4 ml di 0,1 m. H3PO4, scossa fino al dissolto a completamente.
2. centrifughi superiore a 4000 r/min alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per il min 5, finché il liquido non sia chiaro (il campione del miele può direttamente a punto 3 senza centrifuga).
3. aggiunga il µL 900 un NaOH da 1 m., regolano il pH a 7-9 (per pappa reale, trasferisca il surnatante ad una nuova nave).
4. centrifughi superiore a 4000 r/min alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per il min 5, finché il liquido non sia chiaro.
5. prenda un surnatante di 50 µL, aggiunga il µL 350 della soluzione di ridissoluzione diluita e mescoli anche per 30s.
6. prenda a 50 il µL per ulteriore analisi.
Popolare di diluizione del campione: 20
5,4 urina
1. aggiunga correttamente 3 ml la soluzione di ridissoluzione diluita e 1 ml di chiaro campione di urina centrifugato, miscela per 30s.
2. prenda a 50 il µL per ulteriore analisi
Popolare di diluizione del campione: 4
5,5 latte
1. prenda 1 ml di latte, aggiungono la soluzione di ridissoluzione diluita, diluita al 1:19 (Ⅴ/Ⅴ) (un latte di 20 µL + µL 380 la soluzione di ridissoluzione diluita) ed alla miscela per 30s.
2. prenda a 50 il µL per ulteriore analisi
Popolare di diluizione del campione: 20
6. procedure di ELISA
6,1 istruzioni
1. porti tutti i reagenti e strisce micro--bene alla temperatura ambiente (℃ 20-25) prima dell'uso;
2. restituisca tutti i reagenti a ℃ 2-8 subito dopo di uso;
3. La riproducibilità dell'analisi di ELISA, in larga misura, dipende dalla consistenza del lavaggio del piatto. L'operazione corretta del lavaggio del piatto è il punto chiave nelle procedure dell'ELISA;
4. Per l'incubazione alle temperature costanti, tutti i campioni e reagenti devono evitare l'esposizione alla luce ed ogni microplate dovrebbe essere sigillato dalla membrana della copertura.
6,2 procedure di operazione
1. elimini tutti i reagenti necessari e disponga alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per almeno 30min. Si noti che ogni reagente deve essere scosso per mescolarsi uniformemente prima dell'uso;
2. prenda le strisce e le strutture micro--bene richieste del piatto. Ha risigillato il microplate inutilizzato, memorizzato a ℃ 2 - 8;
3. lavare la preparazione dell'amplificatore: diluisca 40 ml del 20× concentrato lavando l'amplificatore con acqua deionizzata al 1:19 (1 parte 20× concentrata lavando amplificatore + 19 parti di acqua deionizzata). O prepari l'amplificatore di lavaggio come quantità stata necessaria.
4. numerare: numeri i micro-pozzi secondo i campioni e la soluzione tipo; ogni campione e soluzione tipo dovrebbero essere eseguiti due volte; registri le loro posizioni;
5. aggiunga il µL 50 del campione o la soluzione tipo per separare i pozzi duplicati, aggiunge il µL 50 del coniugato degli enzimi, quindi aggiunge il µL 50 della soluzione di lavoro dell'anticorpo in ciascuno bene. Mescoli scuotendo delicatamente, sigilli il microplate con la membrana della copertura ed incubi a 25℃ per il min 30;
6. lavi il microplate con l'amplificatore di lavaggio a 250 µL/well per quattro - cinque volte.; inzuppi bene con l'amplificatore per sec 15-30, falda di lavaggio per asciugarsi con carta assorbente (se ci sono le bolle dopo lo sbattimento, le tagliano con le punte pulite);
7. colorazione: aggiunga bene µL 50 il µL della soluzione del substrato A e 50 della soluzione di B in ciascuno. Mescoli scuotendo delicatamente ed incubi a ℃ 25 per il min 15 nello scuro per colorazione;
8. determinazione: aggiunga 50 che il µL di ferma bene la soluzione in ciascuno. Mescoli scuotendo delicatamente. Fissi la lunghezza d'onda del lettore del microplate a 450 nanometro per determinare il valore del OD. (Raccomandi di leggere il valore del OD alla doppio-lunghezza d'onda 450/630 di nanometro nel min 5).
7. giudizio di risultato
Ci sono due metodi per giudicare i risultati; quello primo è il giudizio approssimativo, mentre il secondo è la determinazione quantitativa. Si noti che il valore del OD del campione ha una correlazione negativa con il contenuto dei sulfamidici nel campione.
7,1 determinazione qualitativa
La gamma di concentrazione (ng/ml) ha ottenuto dal confronto il valore medio del OD del campione con quello della soluzione tipo. Presupporre che il valore del OD del Ⅰ del campione sia 0,3 e quello del Ⅱ del campione è 1,0, il valore del OD delle soluzioni tipo è: 2,243 per 0ppb, 1,816 per 1ppb, 1,415 per 3ppb, 0,74 per 9ppb, 0,313 per 27ppb, 0,155 per 81ppb, la gamma di concentrazione del Ⅰ del campione sono di conseguenza 27ppb a 81ppb e quello del Ⅱ del campione è 3ppb a 9ppb. (Moltiplicato per il popolare corrispondente di diluizione)
7,2 determinazione quantitativa
I valori medi dei valori di capacità di assorbimento è equivalenti alla percentuale del valore medio del OD (B) del campione e della soluzione tipo si è diviso dal valore del OD (B0) della prima soluzione tipo (0 norme) e successivamente ha moltiplicato per 100%, cioè,
Percentuale di valore di capacità di assorbimento = della B ×100% /B0
B-the fa la media (doppi pozzi) il valore del OD del campione o della soluzione tipo
B0-the fanno la media il valore del OD della soluzione tipo 0ng/mL
Disegni la curva standard con le percentuali di assorbimento delle soluzioni tipo ed i valori di logaritmo dei semi delle soluzioni tipo dei sulfamidici (ng/ml) come y e ascissa, rispettivamente. Legga la concentrazione corrispondente del campione dalla curva standard comprendendo la sua percentuale di assorbimento nella curva standard. Il valore risultante successivamente è moltiplicato per il popolare corrispondente di diluizione, infine ottenente la concentrazione nei sulfamidici nel campione.
Facendo uso dell'analizzando il software professionale di questo corredo sarà più conveniente per l'analisi precisa e rapida di un gran numero di campioni. (Contattici per favore per questo software).
8. precauzioni
1. La temperatura ambiente inferiore a ℃ 25 o la temperatura dei reagenti e dei campioni che non sono rinviati alla temperatura ambiente (℃ 20-25) condurrà ad un valore più basso del OD di norma.
2. la siccità del microplate nel processo di lavaggio sarà accompagnata dalle situazioni compreso le curve standard non lineari e la riproducibilità indesiderabile; Così continui al punto seguente subito dopo del lavaggio.
3. mescoli uniformemente, altrimenti ci sarà la riproducibilità indesiderabile.
4. La soluzione di arresto è la soluzione acida solforica da 2 m., evita contattare con la pelle.
5. Non usi il corredo che supera la sua data di scadenza. L'uso dei reagenti diluiti o adulterati dai corredi condurrà ai cambiamenti nella sensibilità e nei valori di rilevazione del OD. Non scambi i reagenti dai corredi dei numeri di lotto differenti per usare.
6. metta il microplate inutilizzato in una borsa di automatico-sigillamento per risigillarlo. La sostanza tipo ed il colore incolore precedenti è sensibili alla luce e non possono direttamente essere esposte così alla luce.
7. scarti la soluzione di colorazione con tutto il colore che indica la degenerazione di questa soluzione. Il valore di rilevazione delle 0 soluzioni tipo di meno di 0,5 (A450 nanometro< 0="">
8. La temperatura ottimale della reazione è ℃ 25 e troppo alto o ugualmente le basse temperature provocheranno i cambiamenti nella sensibilità di rilevazione e nei valori del OD.
9. data di scadenza e di stoccaggio
Stoccaggio: deposito a ℃ 2-8, non congelato.
Data di scadenza: 1 anno; la data di produzione è sulla scatola.
