Corredo del test ELISA del cloramfenicolo
Verifichi il principio
Principio
Questo corredo della prova è basato sull'immunotest enzimatico competitivo per la rilevazione di cloramfenicolo nel campione. L'antigene dell'accoppiamento è ricoperto prima sulle bande micro--bene. Il cloramfenicolo nel campione e l'antigene dell'accoppiamento ricoperto prima sulle bande micro--bene competono per l'anticorpo del anti-cloramfenicolo. Dopo che l'aggiunta del coniugato degli enzimi, il substrato di TMB si aggiunge per colorazione. Il valore di (OD) di densità ottica del campione ha una correlazione negativa con il cloramfenicolo in. Questo valore è confrontato alla curva standard e la concentrazione nel cloramfenicolo successivamente è ottenuta.
Specifiche
Sensibilità: 0.1ppb
Limite di segnalazione
Miele circa 0.1ppb
Tasso di reazione crociata
Cloramfenicolo 100%
Tasso < 0="">
di recupero < 0="">
di Thiamphenicol Florfeniol
70±10%
Componenti
1) Strisce micro--bene: 12 strisce con 8 pozzi smontabili ciascuna
2) 6× soluzione tipo (1 ml ciascuno): 0 ppb, 0,05 ppb, 0,15 ppb, 0,45 ppb, ppb 1,35 ppb e 4,05
3) spiritello malevolo del coniugato degli enzimi (12 ml)
4) cappuccio blu concentrato della soluzione di lavoro dell'anticorpo (1 ml)
5) cappuccio bianco della soluzione del substrato A (7 ml)
6) berretto nero della soluzione del substrato B (7 ml)
7) ferma il cappuccio di giallo della soluzione (7 ml)
8) 20× ha concentrato il cappuccio bianco dell'amplificatore di lavaggio (40 ml)
9) 2× ha concentrato la ridissoluzione del cappuccio trasparente della soluzione (50 ml)
Materiali richiesti ma non forniti
1) attrezzature: il lettore del microplate (450nm, 630nm), la stampante, l'omogeneizzatore, il dispositivo dell'azoto-essiccazione, il vortice, l'agitatore, centrifuga (3000g e sopra), misurante pipetta, equilibra (una sensibilità reciproca di 0,01 g), incubatrice (4℃, 25℃), bagno d'acqua, temporizzatore;
2) Micropipettors: µL 20-200 µL ad un solo canale, 100-1000 e µl di otto-Manica 30~300;
3) reagenti (AR): HCl, NaOH, acetato di etile, n-esano.
Pretrattamento del campione
Istruzioni
I seguenti punti devono occuparsi prima del pretrattamento di qualunque genere di campione:
1.Only le punte eliminabili può essere usato per gli esperimenti e le punte devono essere cambiate una volta usate per l'assorbimento dei reagenti differenti;
2. Prima dell'esperimento, ogni attrezzatura sperimentale deve essere pulita e dovrebbe ri-essere pulita se necessario, per evitare la contaminazione che interferisce con i risultati sperimentali.
Preparazione della soluzione prima di pretrattamento del campione:
Miele
1) pesa il campione del miele di 2± 0,05 g nel tubo centrifugo di plastica 50ml;
2) aggiunge forte il NaOH di 2ml 0.1M, scossa per 1min (o vortice di uso per 30s) per dissolversi;
3) aggiunge forte l'acetato, la scossa per 5min, (o vortice di etile 4ml per 1min), preparando il campione e l'acetato di etile contattare completamente;
4) centrifuga superiore a 3000 g alla temperatura ambiente per 5min;
5) prende il surnatante 2ml 10ml nel tubo di vetro (nota: non richieda la fase dell'acqua di giù-strato), soffiano per asciugarsi in bagno d'acqua 50-60℃ dal dispositivo dell'azoto-essiccazione;
6) aggiunge 0.5ml che ridissolve forte la soluzione, scossa per 2min (o vortice di uso per 1min);
7) prende il liquido dello strato di fondo 50ul per la prova.
Popolare di diluizione del campione: 0,5
Procedure di ELISA
Istruzioni
1) porta tutti i reagenti e strisce micro--bene alla temperatura ambiente (℃ 20-25) prima dell'uso;
2) restituisce tutti i reagenti a ℃ 2-8 subito dopo di uso;
3) la riproducibilità dell'analisi di ELISA, in larga misura, dipende dalla consistenza del lavaggio del piatto. L'operazione corretta del lavaggio del piatto è il punto chiave in ELISA le procedure;
4) per l'incubazione alle temperature costanti, tutti i campioni e reagenti devono evitare l'esposizione alla luce ed ogni microplate dovrebbe essere sigillato dalla membrana della copertura.
Procedure di operazione
1. porti il corredo della prova alla temperatura ambiente (℃ 20-25) per almeno il min 30, notano che ogni reagente deve essere scosso per mescolarsi uniformemente prima dell'uso, mettono le strisce micro--bene richieste nelle strutture del piatto. Ha risigillato il microplate inutilizzato, deposito a ℃ 2-8, non si congelano.
2. numerare: numeri i micro-pozzi secondo i campioni e la soluzione tipo; ogni campione e soluzione tipo dovrebbero essere eseguiti due volte, registrano le loro posizioni.
3. aggiunga il µL 50 del campione o della soluzione tipo nei pozzi duplicati separati; poi aggiunga bene delicatamente il µL 50 della soluzione di lavoro dell'anticorpo nell'ogni, miscela scuotendo il piatto manualmente. Sigilli il microplate con la membrana della copertura ed incubi a ℃ 4 per 60min nello scuro.
4. versi il liquido da microwell, si agitano per asciugarsi su carta assorbente, aggiungere 250 µL/well dell'amplificatore di lavaggio al microplate del lavaggio per 15-30 s, quindi eliminare e la falda da asciugarsi con carta assorbente, ripete 3-4 volte. (Se ci sono le bolle dopo lo sbattimento, le hanno tagliate con le punte pulite).
5. aggiunga delicatamente il coniugato degli enzimi 100ul, miscela scuotendo il piatto manualmente (dopo avere lavato il piatto, nonlo metta da parte per la a). Sigilli il microplate con la membrana della copertura ed incubi a ℃ 25 per 20min nello scuro. Lavando come punto 4.
6. colorazione: aggiunga la miscela 100ul della soluzione del substrato A e della soluzione del substrato B in ciascuno pozzo (nota: mescoli la soluzione del substrato A e la soluzione del substrato B al 1:1, utilizza la miscela in 10min, non usa il metallo per contenere o mescolare, evitare il substrato invalido). Mescoli delicatamente scuotendo il piatto manualmente, sigilli il microplate con la membrana della copertura quindi incubi a ℃ 25 per il min 15 a buio per colorazione.
7. determinazione: aggiunga bene il µL 50 della soluzione di arresto in ciascuno. Mescoli delicatamente scuotendo il piatto manualmente. Fermi con successo quando colore del substrato da blu a giallo. Raccomandi di leggere il valore del OD alla doppio-lunghezza d'onda 450/630 di nanometro in 5 minuti.
Giudizio di risultato
Ci sono due metodi per giudicare i risultati: quello primo è il giudizio approssimativo, mentre il secondo è la determinazione quantitativa. Si noti che il valore del OD del campione ha una correlazione negativa con la concentrazione nel metronidazolo.
1. determinazione qualitativa
La gamma di concentrazione (ng/ml) di metronidazolo può essere ottenuta dal paragonare il valore medio del OD del campione a quello della soluzione tipo. Presupporre che il valore del OD del Ⅰ del campione sia 0,3 e quello del Ⅱ del campione è 1,0, il valore del OD delle soluzioni tipo è: 2,243 per 0 ppb, 1,816 per 0,1 ppb, 1,415 per 0,3 ppb, 0,74 per 0,9 ppb, 0,313 per ppb 2,7, 0,155 per ppb 8,1, la gamma di concentrazione del Ⅰ del campione sono di conseguenza ppb 2,7 - 8,1 e quello del Ⅱ del campione è 0,1 a 0.9ppb.
2. determinazione quantitativa
I valori medi dei valori di capacità di assorbimento è ottenuto per il valore medio del OD (B) del campione e della soluzione tipo si è diviso dal valore del OD (B0) della prima soluzione tipo (0 norme) e successivamente ha moltiplicato per 100%, cioè,
Percentuale di valore di capacità di assorbimento = della B ×100%
B0
Valore del OD di media di B-the del campione o della soluzione tipo
B0-the fanno la media il valore del OD delle 0 soluzioni tipo di ng/ml
Disegni la curva standard con le percentuali di assorbimento della soluzione tipo ed i valori del semilogarithm della soluzione tipo del cloramfenicolo (ng/ml) come y e ascissa, rispettivamente. Legga la concentrazione corrispondente del campione dalla curva standard comprendendo la sua percentuale di assorbimento nella curva standard. Il valore risultante successivamente è moltiplicato per il popolare corrispondente di diluizione, infine ottenente la concentrazione nel cloramfenicolo nel campione.
Facendo uso dell'analizzando il software professionale di questo corredo sarà più conveniente per l'analisi precisa e rapida di un gran numero di campioni.
Precauzioni
1. La temperatura ambiente inferiore a ℃ 25 o la temperatura dei reagenti e dei campioni che non sono rinviati alla temperatura ambiente (℃ 20-25) condurrà ad un valore più basso del OD di norma.
2. la siccità del microplate nel processo di lavaggio sarà accompagnata dalle situazioni compreso le curve standard non lineari e la riproducibilità indesiderabile; Così continui al punto seguente subito dopo del lavaggio.
3. mescoli uniformemente, altrimenti ci sarà la riproducibilità indesiderabile.
4. La soluzione di arresto è la soluzione acida solforica da 2 m., evita il contatto con la pelle.
5. Non usi il corredo che supera la sua data di scadenza. L'uso dei reagenti diluiti o adulterati dai corredi condurrà ai cambiamenti nella sensibilità e nei valori di rilevazione del OD. Non scambi i reagenti dai corredi dei lotti differenti per usare.
6. metta il microplate inutilizzato in una borsa di automatico-sigillamento per risigillarlo. La soluzione tipo ed il colore incolore precedenti è sensibili alla luce e non possono direttamente essere esposte così alla luce.
7. scarti la soluzione di colorazione con tutto il colore che indica la degenerazione di questa soluzione. Il valore di rilevazione della soluzione tipo 1 (0 ppb) di meno di 0,5 indica la sua degenerazione.
9. data di scadenza e di stoccaggio
Stoccaggio: deposito a ℃ 2-8, non congelato.
Data di scadenza: 12 mesi; la data di produzione è sulla scatola.
